Rarecells：HPV病毒和抗化放疗生物标志物在肛门鳞状细胞癌患者的循环肿瘤细胞中的检测

https://doi.org/10.1016/j.prp.2023.154327

肛门癌是一种罕见的实体肿瘤，主要是指肛门鳞状细胞癌（SCCA）。根据全球癌症统计数据，2020年新发病例估计超过50,000例，近19,000人死亡。在巴西，2019年，肛门癌导致了893人死亡，其中393名男性和500名女性。

SCCA通常与人乳头瘤病毒（HPV）相关，其主要风险因素包括无保护的肛门性交和免疫抑制性疾病，如长期使用免疫抑制剂和HIV感染。局部SCCA的标准治疗是化学放疗（CRT），使用氟嘧啶类似物和丝裂霉素。由于丝裂霉素在巴西不可获得，因此已开始使用顺铂作为替代药物，因为两种CRT方案的疗效相似。

大约70％至80％的患者可以通过放化疗治愈，但相当一部分患者可能会出现复发或持续疾病。尽管放化疗可以减少复发风险并降低结肠造口率，但约有10％至30％的患者会出现疾病进展，而25％至40％的患者在诊断后3年内需要结肠造口术。因此，添加其他药物和修改治疗策略对于改善疾病控制、减少结肠造口需求和治疗毒性非常重要。在这方面，免疫检查点抑制剂可能是一个选择，因为已经证明对许多实体肿瘤（包括SCCA）有效。PD-1抑制剂如派姆单抗（pembrolizumab）和纳武利尤单抗（nivolumab）已获批用于治疗转移性肛门鳞状细胞癌。然而，对于SCCA局部病变中抗PD-1的作用仍在研究中。鉴于这些疗法可以用于该情况，有必要研究PD-1和SCCA对CRT的耐药性的生物标志物。

在SCCA中，细胞周期依赖性激酶2A（CDK2N）基因编码p16蛋白，其通过免疫组化染色（IHC）评估。与HPV相关的肿瘤中常见到p16的阳性IHC表达，并被认为是HPV相关癌症的替代标志物。p16的IHC表达可作为SCCA患者接受CRT治疗的总生存期和无疾病生存期的独立预后标志物。然而，除了HPV感染外，与CRT耐药性相关的其他因素在SCCA中研究较少。

循环肿瘤细胞（CTCs）的评估是一种液体活检的新技术，可提供有价值的肿瘤生物学信息。尚未对SCCA中的CTCs进行研究。这些细胞中的一些药物抗性标志物，如RAD23B、TYMS和ERCC1，可以评估与耐药性相关的蛋白表达。RAD23B是一种DNA修复蛋白，其表达与放射治疗耐药性相关。该团队先前的研究已经显示，在局部晚期直肠癌患者的CTCs中，基线RAD23B表达是无病理完全缓解的独立预后因子。胸腺嘧啶酸合成酶（TYMS）是参与5-FU代谢途径的酶。肿瘤中TYMS表达的水平似乎可以预测接受5-FU治疗的患者的反应。然而，尽管许多研究报告高TYMS表达的肿瘤总体生存率较差，但该酶的真实预后价值尚未确定。我们先前的一项研究涉及转移性结直肠癌患者，发现CTCs中TYMS的表达与较差的无进展生存期相关，但原发肿瘤或转移组织中的TYMS表达与之无关。ERCC1基因在核苷酸切割修复DNA损伤中起着重要作用，尤其是由紫外线引起的损伤。文献中已经描述，患者接受顺铂治疗时，ERCC1表达增加与较差的总生存率相关。有关SCCA中该蛋白表达的数据尚不明确。

该研究的目标是评估接受CRT治疗的局部SCCA患者的血液中是否存在CTCs，特别是这些细胞中是否存在HPV病毒，并评估在这种情况下可能与CRT耐药性相关的细胞标志物的表达，包括炎性PD-L1蛋白以及与放射治疗（RAD23B）、顺铂（ERCC1）和氟嘧啶类似物（TYMS）相关的标志物。通过这项研究，他们希望初步证明使用CTCs作为SCCA患者诊断、预后和治疗反应评估的潜在新方法，并探索与CRT耐药性相关的生物标志物。这些结果可能有助于个体化SCCA治疗和改善患者预后。

以下为论文摘要：

局部肛门癌主要是指肛门鳞状细胞癌（SCCA），化学放疗（CRT）可以治愈≥80％的病例。开发用于检测/评估循环肿瘤细胞（CTCs）的技术，以用于诊断/预后/治疗反应，可以改变我们治疗/随访SCCA患者的方式。

目的：检测SCCA患者的CTCs，并评估基线和CRT后CTCs中HPV病毒、p16表达以及与CRT耐药性相关的标记物（RAD23B/ERCC1/TYMS）的存在。

方法：使用ISET®方法分离/定量CTCs，使用免疫细胞化学分析蛋白表达，使用染色原位杂交法检测CTCs中的HPV DNA。

结果：该团队招募了15名患者：中位年龄为61岁（43-73岁），其中大部分是女性（10/15）。在基线时，所有患者均检测到CTCs（中位数= 0.4（0.4-3.33）CTCs/mL），在CRT后的9名患者中，8名患者检测到CTCs（中位数= 2.33（0-7.0）CTCs/mL）。在基线时，在CTCs中检测到14/15名患者（93.33％）的HPV DNA，在治疗后的9名患者中检测到7/9名患者（77.7％）的HPV DNA。在中位随访时间为22.20（1.45-38.55）个月时，三名患者在治疗后的CTCs中表达了ERCC1，并且其中一名患者出现了疾病复发。

结论：该研究团队证明了在非转移性SCCA患者的CTCs中检测HPV是可行的，并且似乎是一种敏感的诊断方法。这些结果可能在更好地监测这些患者方面具有临床意义。然而，未来的大规模队列研究可能会证明HPV的存在与SCCA中CRT筛查标记物的表达之间是否存在相关性。

参考文章：

1，https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0344033823000274?via%3Dihub

2，https://www.linkedin.com/company/rarecellsdx/about/

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